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Quando o corpo do seu pai foi roubado do túmulo, Afro (Samuel L. Jackson) retoma a sua espada novamente para destruir um exército de inimigos mortais liderados por um sádico líder. E também tendo que enfrentar a fúria de Sio (Luci Lyu), uma habilidosa guerreira que busca ressuscitar seu irmão Kuma para exterminar Afro. O personagem foi criado pelo artista de mangá Takashi Okazaki e a produção executiva da animação é do ator Samuel L. Jackson, que também faz a voz do personagem principal. A atriz Lucy Liu atuará dessa vez como a vilã, chamada Sio, descrita como "uma sádica e sedutora mente do mal que trama destruir o Afro Samurai". Ainda fazem parte do elenco de vozes nomes como Mark Hamill e Yuri Lowenthal. A história mostra um samurai negro que luta para vingar a morte de seu pai, em um mundo onde a tecnologia e o duelo de espadas coexistem.